上月中旬，貴州大學(xué)王老師在我司訂購了小鼠免疫球M(IgM)elisa試劑盒。實驗結(jié)束后，反映陽性對照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。這是什么原因造成的?我司技術(shù)分析如下：
1. 試劑盒必須在有效期內(nèi)使用， 超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號；
2. 試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行保存，受高溫影響；
3. 試劑、樣品用前未平衡至室溫；
4. 加入試劑的體積和時間有誤， 移液器計量不準(zhǔn)，吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔；
5. 洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力；
6. 孵育時間及孵育溫度未達(dá)到要求 ，反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時注意溫度并及時調(diào)整；
7. 洗板次數(shù)過多，或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求；洗滌沖擊力太大。浸泡時間太長；
8. 顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入；
9. 底物作用時間不夠；
10. 蒸餾水水質(zhì)有問題；
實驗前檢查試劑的組分及批號，確認(rèn)試劑未過期。不要將試劑盒長時間置于常溫下，按使用規(guī)定儲藏。
確定所使用的試劑體積正確，加入時間適當(dāng)。校正移液器，移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快，排放應(yīng)*。
確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈，確認(rèn)配制洗液的純化水達(dá)到要求且未受污染。
孵育溫度應(yīng)控制在37-38℃，孵育時間嚴(yán)格按照說明書操作。保溫期內(nèi)不宜多開門，以免影響保溫。
嚴(yán)格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力，按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數(shù)。
顯色劑滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，后加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入準(zhǔn)確定時間。
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